本书是“色谱技术丛书”中专门介绍高效液相色谱的分册。书中从操作者的角度对高效液相色谱的分类发展与高效液相色谱仪器做了全面介绍，在此基础上对液固色谱法和液液色谱法、正相和反相键合相色谱法、亲水作用键合相色谱法、疏水作用键合相色谱法、微柱液相色谱法、二维高效液相色谱法等多种高效液相色谱方法的色谱分离条件、分析操作、实验技术和注意事项等进行了详细的阐述，并对梯度洗脱的原理和方法以及高效液相色谱法的基本理论做了系统介绍，总结了高效液相色谱新技术的进展。
本次修订根据高效液相色谱近年的发展对第二版内容做了大幅更新，新增了亲水作用键合相色谱法、疏水作用键合相色谱法以及高效液相色谱新技术的进展三章，删除了第二版中体积排阻色谱法和高效液相色谱分离条件的优化两章。对其他各章增补了仪器、填料、理论和应用方面的最新进展和技术资料。
本书适用于各领域中从事液相色谱分析工作的技术人员学习参考，也可作为高等院校分析化学及相关专业师生的教学参考书。
于世林，北京化工大学教授，1960年毕业干北京大学化学系，曾任北京化工大学应用化学系系主任，现为分析化学教授，北京理化分析测试学会色谱分会理事。多年从事分析化学、色谱分析的教学和科研工作，承担多项有关高效液相亲和色谱固定相合成及应用的国家自然科学基金项目和北京市自然科学基金项目。主持编写《亲和色谱方法及应用》《高效液相色谱方法及应用》《波谱分析法》《分析化学》等著作和教材8册，参与《分析仪器手册》《化验员读本》等4册著作部分章节的编写工作。
第一章 绪论
第一节 高效液相色谱方法简介 2
一、液相色谱技术的初现—茨维特的经典实验 2
二、高效液相色谱方法的显现 3
三、高效液相色谱方法的发展现状 6
第二节 高效液相色谱方法的特点 13
一、与经典液相（柱）色谱法比较 13
二、与气相色谱法比较 14
三、高效液相色谱法的特点 15
第三节 高效液相色谱方法的分类 15
一、按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类 15
二、按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类 17
第四节 高效液相色谱法的应用范围和局限性 19
一、应用范围 19
二、方法的局限性 19
参考文献 20
第二章 高效液相色谱仪简介
第一节 流动相及储液罐 23
一、储液罐 23
二、流动相脱气 24
第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置 26
一、高压输液泵 26
二、输液系统的辅助设备 39
三、梯度洗脱装置 41
第三节 进样装置 44
一、停流进样装置 44
二、六通阀进样装置 45
三、自动进样器 47
第四节 色谱柱 48
一、柱材料及规格 48
二、柱填料和柱寿命 49
三、保护柱 50
四、柱连接方式 51
五、柱温控制 51
第五节 检测器 52
一、检测器的分类和响应特性 52
二、紫外吸收检测器 54
三、折光指数检测器 60
四、电导检测器 62
五、荧光检测器 63
六、蒸发光散射检测器 64
七、带电荷气溶胶检测器 68
八、多角度光散射检测器 70
九、质谱检测器 72
第六节 色谱数据处理装置 81
一、手持控制器 81
二、化学工作站 81
第七节 高效液相色谱仪器的发展趋势 82
一、从1969年到1992年 82
二、从1992年到2002年 83
三、从2002年到2012年 83
四、2012年到现在 84
参考文献 88
第三章 液固色谱法和液液色谱法
第一节 分离原理 90
一、吸附系数 90
二、分配系数 91
第二节 固定相 92
一、液固色谱固定相 92
二、液液色谱固定相 106
第三节 流动相 107
一、表征溶剂特性的重要参数 109
二、液固和液液色谱的流动相 116
第四节 二元溶剂体系中液固和液液色谱的保留规律 117
一、溶质保留值的基本方程式 117
二、液固色谱的保留值方程式 118
三、液液色谱的保留值方程式 118
参考文献 119
第四章 正相和反相键合相色谱法
第一节 分离原理 120
一、正相键合相色谱法的分离原理 121
二、反相键合相色谱法的分离原理 121
第二节 固定相 123
一、键合固定相的制备及分类 123
二、键合固定相的性质 129
三、使用键合固定相应注意的问题 131
第三节 流动相 133
一、溶剂的选择性分组 133
二、在键合相色谱分析中选择流动相的一般原则 134
三、改善色谱分离选择性的方法 138
四、多元混合溶剂的多重选择性 140
五、由溶剂选择性三角形描述混合溶剂组成的特性 143
六、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律 143
七、用线性溶剂化自由能关系（LSER）来表征反相液相色谱中溶质的保留值方程式 144
第四节 新型高效化学键合固定相 146
一、新型单齿键合固定相 146
二、新型双齿键合固定相 148
三、杂化有机/无机粒子材料 149
四、氟化烷基和苯基固定相 152
五、反相/离子交换混合模式固定相 154
第五节 化学键合固定相分类方法简介 157
一、Tanaka分类方法 158
二、Tanaka分类表征方法 160
三、扩展Tanaka分类方法 161
第六节 离子对色谱法 166
一、分离原理 166
二、固定相、流动相和对（反）离子 167
三、影响离子对色谱分离选择性的因素 168
参考文献 171
第五章 亲水作用键合相色谱法
第一节 亲水作用液相色谱的分离机理 176
一、分子极性 176
二、分离机理 176
第二节 固定相 178
一、固定相的分类 178
二、固定相保留特性及选择性的评价标准 188
第三节 流动相 197
一、流动相的组成 197
二、流动相对保留值和选择性的影响 197
三、流动相各种影响因素的图示方法 205
第四节 静电排斥亲水作用液相色谱 207
参考文献 209
第六章 疏水作用键合相色谱法
第一节 疏水作用液相色谱的分离原理 211
一、蛋白质结构特点 212
二、疏水作用机理 212
三、两亲作用色谱 213
第二节 固定相 214
一、固定相载体 214
二、疏水配位体 215
第三节 流动相 215
一、流动相的组成 215
二、影响HIC分离选择性的因素 216
第四节 疏水作用色谱的应用 217
一、疏水作用色谱的操作过程 217
二、蛋白质混合物的分离 218
参考文献 219
第七章 梯度洗脱
第一节 基本原理 221
一、等度洗脱 221
二、梯度洗脱 222
第二节 影响梯度洗脱的各种因素 224
一、梯度洗脱时间（tG）对分离的影响 224
二、梯度陡度（T）对保留值的影响 224
三、强洗脱溶剂组分B浓度变化范围（Δφ）的影响 225
四、柱温变化对保留值的影响 227
五、梯度洗脱程序曲线形状的影响 228
六、流动相流速（F）对梯度洗脱的影响 229
七、色谱柱死体积（Vm）对梯度洗脱时间（tG）的影响 231
八、色谱系统的滞留体积（VD）对梯度洗脱时间（tG）的影响 231
第三节 优化梯度洗脱的方法 232
一、建立梯度洗脱方法的一般步骤 232
二、梯度洗脱中的实验条件 234
第四节 梯度洗脱的图示方法 237
一、二元溶剂梯度洗脱 237
二、三元溶剂梯度洗脱 238
三、四元溶剂梯度洗脱 240
四、用极坐标和球面坐标描述梯度洗脱 241
参考文献 243
第八章 高效液相色谱法的基本理论
第一节 表征液相色谱柱填充性能的重要参数 245
一、总孔率 246
二、柱压力降 246
三、柱渗透率 247
第二节 高效液相色谱的速率理论 247
一、影响色谱峰形扩展的各种因素 248
二、范第姆特方程式的表达及图示 251
第三节 诺克斯方程式 252
一、描述色谱柱性能的折合参数 252
二、诺克斯方程式 253
三、诺克斯方程式在表面多孔粒子（SPP）填充色谱柱中的应用 255
第四节 色谱柱的操作参数、“无限直径” 效应和柱外效应 257
一、三个柱操作参数的表达式 257
二、“无限直径”效应 257
三、柱外效应 259
第五节 分离阻抗和动力学图 261
一、分离阻抗 261
二、动力学图 262
第六节 超高效液相色谱 269
一、超高效液相色谱的理论基础 269
二、实现超高效液相色谱的必要条件 271
三、超高效液相色谱的特点、现状及在快速和超快速液相色谱分析中的应用 277
四、HPLC和UHPLC之间的方法转换 284
第七节 高效液相色谱分离条件的优化 291
一、色谱参数的分类 291
二、色谱参数的相关性 291
三、色谱分离条件优化标准的选择 292
四、色谱分离条件的优化方法 293
五、等度洗脱和梯度洗脱的优化图示方法 293
六、优化HPLC分离条件的计算机辅助方法 296
参考文献 297
第九章 微柱液相色谱法
第一节 方法简介 299
一、微型柱的分类 300
二、微柱液相色谱法的优点和缺点 301
第二节 基本理论 302
一、柱外效应 302
二、管壁效应 305
三、稀释效应 307
四、分离阻抗 308
第三节 仪器装置 308
一、输液泵系统 309
二、进样系统 310
三、柱系统 314
四、检测器系统 315
五、连接管和接头 318
第四节 微柱的制备 319
一、评价微柱性能的重要参数 320
二、影响微柱分离效率的相关参数 321
三、微柱的制备方法 322
第五节 微柱液相色谱的新技术 326
一、纳米液相色谱技术 327
二、填充毛细管柱超高压液相色谱技术 335
参考文献 343
第十章 二维高效液相色谱法
第一节 描述分离体系效能的参数 345
一、峰容量 345
二、信息量 347
第二节 二维高效液相色谱的技术功能 348
一、切割功能 349
二、反冲洗脱功能 350
三、痕量组分的富集功能 350
第三节 二维高效液相色谱的流路系统 350
一、多通路切换阀 351
二、流路系统 351
第四节 二维高效液相色谱在蛋白质组学研究中的应用 357
第五节 二维高效液相色谱在食品分析中的应用 368
一、离线全二维高效液相色谱分析蓝莓中的色素 369
二、在线全二维高效液相色谱分析脂肪酸三甘油酯 370
三、在线全二维高效液相色谱分析红辣胡椒中的类胡萝卜素和类胡萝卜素酯 371
四、在线全二维高效液相色谱分析天然抗氧化剂中的有效成分 371
参考文献 372
第十一章 高效液相色谱新技术进展
第一节 整体色谱柱 374
一、聚合物整体柱 375
二、硅胶整体柱 378
第二节 绿色流动相 383
一、超热水流动相 384
二、其他绿色流动相 387
第三节 剪切驱动色谱 387
一、仪器构成及操作方法 388
二、固定相、流动相和分析实例 390
第四节 超高效合相色谱 391
一、超高效合相色谱方法原理简介 391
二、超高效合相色谱仪的结构特点 394
三、超高效合相色谱仪的性能特点 398
参考文献 402
第十二章 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤和实验技术
第一节 样品的性质及柱分离模式的选择 405
一、样品的溶解度 405
二、样品的分子量范围 406
三、样品的分子结构和分析特性 406
第二节 分离操作条件的选择 412
一、容量因子和死时间的测量 412
二、色谱柱操作参数的选择 413
三、样品组分保留值和容量因子的选择 414
四、相邻组分的选择性系数和分离度的选择 414
第三节 高效液相色谱法的实验技术 416
一、溶剂的纯化技术 416
二、色谱柱的装填技术 416
三、色谱柱的平衡、保护与清洗、再生技术 420
四、梯度洗脱技术 425
五、色谱柱前和柱后的衍生化技术 426
六、样品的预处理技术 428
参考文献 437
符号表 439
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