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化学分析中HPLC方法的选择
《Selection of the HPLC method in chemical analysis原著作者为Serban C. Moldoveanu和Victor David。
这是一本全面的介绍液相色谱理论和方法开发的指导性书籍。从高效液相色谱(HPLC)和分类和原理开始讲解,引出HPLC分析方法的选择。所涉内容包括:HPLC方法所面对的常见待测成分和基质特征,不同类型固定相的制备,自身特性与适用范围;流动相、添加剂的特性与选择。在附录中还按照分类详细列举了各种商品化的固定相及分析柱的参数。无论是对初入分析领域的学生,还是分析技术岗位上的检验人员,本书都具有较强的参考价值。有助于分析人员在了解、使用现有分析方法的同时,去开发更新的方法。 适读人群 :从事液相色谱仪器分析及仪器研制相关的研究生、研究人员和技术人员 《化学分析中HPLC方法的选择》为高效液相色谱的使用者提供了一个指导,给出了方法的选择、发展和验证的标准。 高效液相色谱(HPLC)是目前化学分析应用中常见的技术。然而,对于一个特定的分析目标,在获知其适宜信息的过程中需要很多工作,并且要求具备对这一领域内现有知识的掌握。进一步讲,从已经发布的数据和文献中筛选出对本研究有价值的信息,这个工作本身也是耗时耗力的,占据了HPLC方法选择的主要方面。 这本书首次在一本书中给出了一个系统性的方法,帮助使用者对所得到的信息进行甄别,重点讨论了针对特定分析中HPLC方法选择的新进展。《化学分析中HPLC方法的选择》包容性强,要想同时获得HPLC方法的选择、发展和验证信息,就选择这本书。 主要特色: ·指出了要想得到可靠的HPLC分析结果,所需要的实践与仪器操作的各个方面 ·帮助研究者从繁杂的已知信息中选择获得适合的HPLC方法。 ·为HPLC方法的选择,发展和验证提供标准。 ·由国际知名HPLC专家团队执笔,他们加起来在这一领域内具备超过60年的研究经验。
译者前言
高效液相色谱(HPLC)技术在分析化学中的地位无须赘述。HPLC分析工作者在实践中面对的主要问题就是:针对特定研究对象,如何在可获得的仪器、设备及耗材中选择合适的分析方法。一般来讲,这种选择,或者是源自经验,或者是源自文献报道。而最终方法的开发,一定是建立在实践,即实验现象的基础上。 可是,无论是我们现代大学阶段分析化学专业的课程设置,还是仪器供应商对于仪器和耗材的详细说明,甚至是仪器使用培训,又或者是其他类相关的书籍,由于侧重点不同,都缺少对于方法开发较为详尽和系统的介绍。要选择和开发一种合适的HPLC方法,不仅仅要看到实验现象,更要透过现象去看方法的本质,这对于方法的选择更为重要。《化学分析中HPLC方法的选择》实际上填补了这一领域的空白。对于初入分析行业的毕业生,专门从事色谱研究的研究人员,或者是专业的色谱柱开发人员,如果想要用好HPLC,都可以在本书的相关内容中找到有用的答案。 本书从分析方法的总体出发,在照顾到各种类型分析方法的同时,突出了HPLC方法的地位和作用;而后,紧扣HPLC方法的选择这一主题,针对仪器构造、工作原理、特征参数及其相互关系的多个方面,对该方法进行了详细的介绍;从第6章开始,对非常广泛的、不同类型HPLC的分析柱进行了剖析;最后是关于HPLC中特有的流动相和梯度的讨论。本书在内容方面虽然更侧重于理论,但是语言浅显易懂,讲解深入浅出,使得内容并不艰涩。 随着时间改变,HPLC技术也在不断地发展,一些新的、打破常规思维的技术也在相继涌出。学科的发展都是交互的,我们期待变革,我们更拥抱变革。 本书的翻译主要由国家烟草质量监督检验中心、浙江方圆检测集团股份有限公司及浙江树人大学的相关工作人员完成,译者们长期从事HPLC分析工作,具有扎实的专业基础知识。译者在翻译中,始终保持端正认真的工作态度,力求实现“作者的原意、译者的理解、受者的感悟”三者之间的相互融合,但是受限于时间及能力水平,译文中会出现疏漏和不妥之处,恳请读者批评指正。 最后,感谢化学工业出版社的编辑对本书出版所做的工作和努力。 王 颖 2021年6月于郑州 前言 高效液相色谱(HPLC)可能是分析化学领域应用最多的一项技术。在同行评审的期刊、书籍、制造商目录和互联网上,都提供了大量有关HPLC的信息。从众多来源中为给定目标选择最合适的HPLC方法是一项具有挑战性的任务。此外,随着仪器和新型色谱材料的发展,新的、更具选择性和灵敏度高的HPLC方法可能不断涌现。虽然在这方面有许多零散的出版物,但是文献中还是缺乏对选择与开发HPLC方法与过程的一致性和连贯性介绍,本书尽可能对此进行弥补。当文献中有针对特定任务的相关方法时,它为选择适当的方法提供了标准;当文献没有对特定目标描述适合的方法时,它为新方法的建立提供了指导。本书意在针对HPLC方法的选择提供系统的、最新的材料。然而,HPLC技术也在不断发展中,只有最近的文献才能捕捉到最新的技术。 本书总体上分为四个部分,第一部分介绍了在选择新的分析方法之前对于必要信息的收集。关于数据的统计分析、方法的验证标准,以及关于化学分析中使用的替代技术的一般性讨论也在这一部分进行介绍。这一部分还介绍了与其他分析技术相比较,HPLC作为首选分析方法时的优缺点。第二部分描述了HPLC的各个方面,如仪器、色谱分离的特征参数以及几种HPLC类型的保留机制。第三部分详细介绍了HPLC分析柱的特征,以及针对特定的分析任务,选择适宜分析柱的标准。本部分还对可能选择和使用的流动相进行了详细说明。本书的最后一部分是一组表格,是关于色谱柱、溶剂和添加剂的详细信息。这些数据为选择或开发新的HPLC方法提供了重要的信息来源。 Owen Bussey,Crystal Byrd,Chelsea Cooke,Garry Dull,Anthony Gerardi,Christopher Junker,Carol Moldoveanu和Wayne Scott为改进本书材料的介绍提供了有益的建议帮助,笔者对此表示感激。笔者还要感谢Elsevier出版公司的编辑团队,Amy Clark,Maria Bernard和Kathryn Morrissey对本书出版所做的贡献。 编著者
Serban C.Moldoveanu博士是雷诺烟草控股公司的高级首席科学家。他的科研活动主要集中在色谱分析的多个方面,包括天然产物和烟气的GC/MS,HPLC以及LC/MS/MS分析方法的开发。他发表了130多篇文献。
Victor David博士是罗马尼亚布加勒斯特大学的教授,并且是分析化学系的主任。他发表了120多篇文献。 王颖,郑州烟草研究院,高级工程师,研究方向:烟草、烟气、烟用材料化学分析;主要研究成果:毕业至今一直从事烟草、烟草制品及烟用材料化学分析检验,熟悉各种类型的色谱、质谱及光谱技术;负责和参与完成多个行业及国家标准制修订项目;申请发明专利和实用新型专利共计43项,且均获得授权;发表SCI、EI及国内核心期刊文章20多篇;出版译著和编著5本;获得行业标准贡献三等奖一项。
第1章 开始应用一个新的HPLC方法 1
1.1 收集信息,为新方法做准备 1 1.1.1 分析的目的 1 1.1.2 样品的一般信息 2 1.1.3 样品组成 3 1.1.4 结果的质量要求 5 1.1.5 仪器的可获得性、实验室的专业知识和资金 5 1.1.6 有关各种分析方法的信息 5 1.1.7 仪器的新发展 6 1.2 分析技术概述 7 1.2.1 样品采集 7 1.2.2 样品制备步骤 7 1.2.3 核心分析步骤 8 1.2.4 数据评估 10 1.2.5 定性和定量分析 10 1.2.6 一个分析方法选择的决定过程 12 1.3 数据的统计评估和标准方法验证 13 1.3.1 化学定量分析中的精密度和准确度 13 1.3.2 灵敏度和检测限 16 1.3.3 实际LOD和LOQ(PLOD和PLOQ) 20 1.3.4 仪器响应的线性和最小二乘回归 20 1.3.5 两个分析方法所得结果的统计学比较 22 1.3.6 分析方法的验证 23 参考文献 26 第2章 不含独立分离步骤的分析技术简介 28 2.1 不含独立分离步骤的分析技术的分类总结 28 2.2 光学技术 28 2.2.1 吸收光谱 30 2.2.2 发射光谱 31 2.2.3 光学非光谱分析 33 2.3 质谱 33 2.3.1 电子撞击离子源 34 2.3.2 化学电离源 36 2.3.3 LC-MS中的电喷雾电离源和大气压化学电离源 36 2.3.4 其他的离子化技术 38 2.3.5 LC-MS中的离子抑制 38 2.3.6 质谱中的离子分离 39 2.4 电化学方法 41 2.4.1 电位法 42 2.4.2 安培法和库仑法 43 2.4.3 电导法 45 2.5 不包含样品组分分离的其他分析技术 45 2.5.1 X射线光谱 45 2.5.2 核磁共振 46 2.5.3 放射化学法 46 2.5.4 热分析法 46 2.6 非联结与包含分离步骤的分析方法的选择 47 参考文献 48 第3章 包含分离步骤的主要分析技术简介 50 3.1 核心分析技术中所使用的分离步骤的类型 50 3.1.1 色谱分离 50 3.1.2 分析色谱的在线固相萃取 54 3.1.3 电分离 54 3.1.4 膜分离 56 3.1.5 为核心分析步骤选择一个分离技术 56 3.2 气相色谱 57 3.2.1 典型的气相色谱仪 58 3.2.2 气相色谱的进样器 58 3.2.3 气相色谱柱温箱和分析柱 60 3.2.4 气相色谱的检测器 61 3.3 超临界流体色谱 62 3.4 高效液相色谱 64 3.4.1 根据分离机理对高效液相色谱进行分类 65 3.4.2 分析型高效液相色谱的其他分类 69 3.5 电泳和电色谱 70 3.5.1 电泳 70 3.5.2 电色谱法 72 3.6 气相色谱(GC)、超临界流体色谱(SFC)、区间电泳(CEZ)或高效液相色谱(HPLC)的选择 72 3.6.1 与HPLC对比,选择GC作为分析方法 72 3.6.2 与HPLC对比,选择SFC作为分析方法 74 3.6.3 与HPLC对比,选择CZE作为分析方法 74 3.6.4 选择HPLC作为分析方法的利弊 75 参考文献 76 第4章 HPLC技术的基础知识 79 4.1 HPLC仪器的基础知识 79 4.1.1 溶剂供应系统 80 4.1.2 泵系统和流动相 81 4.1.3 进样器和自动进样器 85 4.1.4 管道和接头 87 4.1.5 色谱柱 87 4.1.6 HPLC和UPLC的检测器的主要特点 90 4.1.7 HPLC和UPLC中使用的检测器类型 93 4.1.8 HPLC检测器的选择 104 4.1.9 HPLC系统的其他配件装置 107 4.1.10 更复杂的HPLC配置 108 4.1.11 仪器控制和数据处理单元 109 4.1.12 HPLC系统的选择以及HPLC到UPLC的发展 110 4.2 描述色谱过程的参数 110 4.2.1 流动相的流速 110 4.2.2 保留时间 111 4.2.3 运行时间 112 4.2.4 保留体积 112 4.2.5 迁移率 113 4.2.6 HPLC分离中的平衡常数和相比 114 4.2.7 保留因子 115 4.2.8 理想的色谱峰形特征 117 4.2.9 柱效 121 4.2.10 峰展宽的影响因素和van Deemter方程 122 4.2.11 不对称峰 125 4.2.12 选择性(分离因子) 126 4.2.13 分离度 127 4.2.14 峰容量 129 4.2.15 梯度分离的色谱峰特征 130 4.2.16 色谱峰特征小结 132 4.2.17 HPLC中的定量 132 4.2.18 色谱柱中的样品体积和进样量 135 4.3 不同类型HPLC的保留和洗脱机理 137 4.3.1 分配平衡及其热力学 137 4.3.2 吸附平衡 140 4.3.3 极性在分离机制中的作用 141 4.3.4 反相HPLC的机理 142 4.3.5 疏溶剂理论预测的RP-HPLC的保留因子 146 4.3.6 离子对色谱(IPC)的机理 149 4.3.7 正相HPLC(NP-HPLC或NPC)和HILIC的机理 150 4.3.8 离子交换色谱中的平衡 153 4.3.9 尺寸排阻色谱(SEC)的机理 155 4.3.10 手性色谱的机理 158 4.3.11 其他色谱类型的保留过程 162 4.4 pH、温度和添加剂对保留平衡的影响 162 4.4.1 pH值对保留平衡的影响 162 4.4.2 温度对保留平衡的影响 165 4.4.3 未参与平衡的添加剂的影响 166 4.4.4 离液盐对平衡的影响 166 参考文献 167 第5章 待测成分和基质特征决定HPLC方法的选择 173 5.1 与分离有关的物理化学性质 173 5.1.1 化学构成和结构 173 5.1.2 分子量 174 5.1.3 溶质的酸碱性 175 5.1.4 等电点 175 5.1.5 分子极性的一部分:偶极矩 175 5.1.6 分子极性的一部分:极化率 176 5.1.7 分子极性的一部分:氢键能力 176 5.1.8 辛醇/水分配系数及其在判断极性中的应用 176 5.1.9 摩尔体积 179 5.1.10 非电解质化合物的溶解度 179 5.1.11 范德华分子体积和表面积 182 5.2 与检测有关的物理化学性质 183 5.2.1 UV-Vis吸收 183 5.2.2 荧光 184 5.2.3 化学发光 185 5.2.4 折射率 185 5.2.5 质谱 186 5.2.6 电化学性质 186 5.3 基于样品特性选择HPLC分离 187 5.3.1 根据样品在日常生活中的用途进行分类 187 5.3.2 根据样品在日常生活中的用途进行分析方法的选择 191 5.4 基于待测成分特性选择HPLC分离 192 5.4.1 分析物的化学性质 192 5.4.2 酸碱中的pKa 195 5.4.3 辛醇/水分配系数 195 5.4.4 分析物的浓度 199 5.5 基于基质选择HPLC分离 200 5.5.1 基质的化学性质 200 5.5.2 基质的量 201 5.6 对样品特性进行考察,以选择适宜的HPLC检测器 204 5.6.1 定性或定量分析的检测器选择 205 5.6.2 基于分析物特定物理化学性质对检测器的选择 205 5.6.3 分析物浓度在HPLC检测选择中的作用 207 参考文献 208 第6章 HPLC分析柱的一般特征 212 6.1 HPLC分析柱的构成 212 6.1.1 色谱柱的外部柱体 212 6.1.2 色谱柱的填料 213 6.1.3 填充柱固相载体的物理特性 213 6.1.4 填充柱固相载体的化学特性 215 6.1.5 二氧化硅作为固定相的固相载体 216 6.1.6 硅胶基整体色谱柱 221 6.1.7 填充柱中的核-壳颗粒 222 6.1.8 二氧化硅固相载体的衍生化 223 6.1.9 不同于水合二氧化硅的无机载体固定相 228 6.1.10 有机聚合物作为固定相 228 6.1.11 固定相的理化特性研究 229 6.2 对分离有影响的分析柱的特性 229 6.2.1 柱体尺寸影响分离 230 6.2.2 固定相的物理性质对分离的影响 234 6.2.3 固定相的化学性质对分离的影响 238 6.2.4 采用辛醇/水分布系数表征固定相极性 241 6.2.5 USP色谱柱分类 244 6.3 分析柱选择、使用和保管的一般准则 244 6.3.1 色谱柱选择时需要考虑的参数 245 6.3.2 色谱柱选择标准总结 247 6.3.3 正交分离色谱柱的选择 248 6.3.4 柱的保护和保存 248 参考文献 250 第7章 RP-HPLC分析柱 254 7.1 反相固定相的类型及其制备方法 254 7.1.1 RP-HPLC中使用固定相的主要类型 254 7.1.2 RP固定相的制备 254 7.2 反相HPLC分析柱的特点 257 7.2.1 疏水固定相和分析柱的基本物理性质 258 7.2.2 疏水固定相的基本化学性质 259 7.2.3 疏水性 259 7.2.4 封端和硅羟基活性 261 7.2.5 增强固定相的pH和盐稳定性 262 7.2.6 相比 264 7.2.7 平衡常数K(X) 266 7.2.8 可润湿性 268 7.3 反相HPLC分析柱的表征参数 269 7.3.1 柱效(理论塔板数) 270 7.3.2 疏水分析柱的保留能力 270 7.3.3 lgk' 的预测公式 271 7.3.4 疏水柱的一般选择性和亚甲基选择性 272 7.3.5 RP-HPLC分析柱峰的不对称性 276 7.3.6 RP-HPLC色谱柱表征的其他各种参数与测试 277 7.3.7 疏水消除模型用于选择性表征 280 7.3.8 色谱柱老化的评估测试 282 7.4 常见的和特殊的反相分析柱 283 7.4.1 常见的反相分析柱 283 7.4.2 特殊类型的疏水相 285 7.5 反相HPLC分析柱的选择 288 7.5.1 分析柱物理特性的选择 291 7.5.2 用于分析具有疏水部分的小分子的分析柱 291 7.5.3 用于分析多肽和蛋白质的色谱柱 294 7.5.4 新发展 295 参考文献 295 第8章 极性分析柱 302 8.1 极性HPLC固定相的类型及其制备 302 8.1.1 极性固定相的主要类型 302 8.1.2 极性固定相的制备 303 8.2 极性HPLC固定相的性能和表征 305 8.2.1 极性固定相和色谱柱的物理性质 305 8.2.2 极性固定相的化学性质 306 8.2.3 极性色谱柱的保留和分离能力 307 8.2.4 HILIC色谱柱的表征参数和测试 308 8.3 具有极性固定相的分析柱 311 8.3.1 裸二氧化硅色谱柱 312 8.3.2 具有键合相的中性HILIC固定相 312 8.3.3 阴离子交换HILIC固定相 313 8.3.4 阳离子交换HILIC固定相 313 8.3.5 两性离子HILIC固定相 313 8.3.6 具有一种类型以上的固定相(混合模式HILIC固定相) 314 8.3.7 基于二氧化硅氢化物的固定相 314 8.4 极性分析柱的选择 315 8.4.1 色谱柱物理特征的选择 316 8.4.2 色谱柱固定相性质的选择 317 8.4.3 在HILIC色谱柱选择中的其他重要参数 318 8.4.4 新进展 318 参考文献 318 第9章 离子交换、离子调节和配体交换色谱的固定相和色谱柱 321 9.1 固定相的类型及其制备 321 9.1.1 离子交换固定相的类型 321 9.1.2 离子调节(排斥)固定相和配体交换固定相 322 9.1.3 具有多种类型基团的固定相(混合模式离子交换相) 322 9.1.4 离子交换相合成方法概述 323 9.1.5 乳胶附聚型离子交换剂 324 9.2 离子交换固定相的特征 325 9.2.1 离子容量测定 326 9.2.2 溶剂相容性 326 9.2.3 特定离子的相亲和力 326 9.2.4 离子色谱柱的疏水性 328 9.3 离子交换固定相的常用分析柱 328 9.3.1 基于二氧化硅的阳离子交换相 328 9.3.2 有机聚合阳离子交换相 328 9.3.3 基于二氧化硅的阴离子交换相 328 9.3.4 有机聚合物阴离子交换相 329 9.3.5 毛细管电泳离子色谱柱 329 9.3.6 离子排斥固定相 330 9.3.7 其他固定相 330 9.4 离子交换固定相的选择 330 参考文献 332 第10章 手性色谱的固定相和色谱柱 334 10.1 手性固定相的类型和制备 334 10.1.1 手性固定相的类型 334 10.1.2 刷型或Pirkle型手性固定相 335 10.1.3 纤维素手性固定相 336 10.1.4 直链淀粉手性固定相 337 10.1.5 环糊精和环果聚糖手性相 338 10.1.6 冠醚手性固定相 339 10.1.7 大环抗生素和糖肽 339 10.1.8 蛋白质手性固定相 340 10.1.9 配体交换手性固定相 340 10.1.10 手性合成聚合物 340 10.2 手性固定相的特征 341 10.3 手性固定相的选择 342 10.3.1 色谱柱的选择在手性分离方法发展中的作用 342 参考文献 344 第11章 尺寸排阻色谱的固定相和色谱柱 348 11.1 固定相的类型和制备 348 11.1.1 硅胶载体的SEC固定相和玻璃固定相 348 11.1.2 聚合物固定相在SEC中的应用 349 11.2 尺寸排阻固定相和分析柱的特征 351 11.2.1 孔隙率和粒径 351 11.2.2 惰性和回收率 352 11.3 在SEC中分析柱的选择 352 11.3.1 SEC柱的选择因素 352 11.3.2 新进展 355 参考文献 355 第12章 免疫亲和分离的固定相和分析柱 357 12.1 免疫亲和色谱中固定相的载体 357 12.2 免疫亲和色谱中的活性固定相 358 参考文献 360 第13章 流动相中使用的溶剂、缓冲溶液和添加剂 362 13.1 用来作为溶剂的液体的特征 362 13.1.1 溶剂的混溶性 362 13.1.2 具有Hildebrand溶解度参数的溶剂的特征 363 13.1.3 使用辛醇/水分配系数Kow的溶剂特征 367 13.1.4 在液-气分配基础上对溶剂进行表征 369 13.1.5 Solvatochromic模型和Kamlete-Taft参数 371 13.1.6 洗脱强度 372 13.2 影响分离的液体的其他特性 372 13.2.1 溶剂黏度 372 13.2.2 表面张力 374 13.2.3 介电常数、偶极矩和极化率 375 13.2.4 溶剂分子的氢键键合 376 13.2.5 溶剂沸点 376 13.3 溶剂性质对于检测的重要性 376 13.3.1 折射率 377 13.3.2 紫外截止波长 377 13.3.3 荧光 378 13.3.4 溶剂对质谱检测的影响 378 13.3.5 与检测有关的其他属性 380 13.4 缓冲溶液和添加剂 380 13.4.1 缓冲溶液的pH 381 13.4.2 HPLC中常用的缓冲溶液 383 13.4.3 部分水性溶剂混合物中的缓冲溶液 384 13.4.4 温度对缓冲溶液pH值的影响 387 13.4.5 缓冲溶液在部分有机流动相中的溶解度 388 13.4.6 添加剂 388 13.4.7 缓冲溶液和添加剂对色谱柱稳定性和性能的影响 390 13.4.8 缓冲溶液和添加剂在HPLC检测中的适用性 390 13.5 HPLC中流动相的选择 391 13.5.1 HPLC中的溶剂纯度 392 13.5.2 RP-HPLC使用的流动相 392 13.5.3 离子对HPLC中使用的溶剂、离子对试剂和添加剂 395 13.5.4 HILIC和NPC中使用的流动相 397 13.5.5 离子交换和离子调节色谱中使用的流动相 398 13.5.6 手性色谱柱中的流动相 401 13.5.7 尺寸排阻分离流动相 402 13.5.8 流动相的流速、温度和脱气 404 13.6 样品进样溶剂的选择 405 13.6.1 色谱过程中样品溶剂的作用 405 13.6.2 通过其他方法将样品聚焦在色谱柱头 407 13.6.3 样品溶剂对检测的影响 408 13.7 洗针溶剂的选择 408 参考文献 409 第14章 梯度洗脱 416 14.1 HPLC中梯度的应用 416 14.1.1 采用梯度的目的 416 14.1.2 梯度洗脱的应用 418 14.1.3 溶剂组成的梯度 419 14.1.4 pH的梯度 420 14.1.5 流速的梯度 420 14.2 梯度分离的表征参数 421 14.2.1 梯度分离中的保留因子 421 14.2.2 表征梯度分离色谱图的其他参数 422 14.3 不同色谱类型中梯度的选择 423 14.3.1 RP-HPLC和非水反相色谱中的梯度 423 14.3.2 离子对色谱中的梯度 424 14.3.3 HILIC中的梯度 424 14.3.4 离子色谱中的梯度 425 参考文献 425 第15章 HPLC实践 427 15.1 开发一个HPLC方法 427 15.1.1 文献方法的实现 427 15.1.2 文献方法的改进 429 15.1.3 开发新的HPLC方法 430 15.1.4 方法优化 431 15.2 特殊的HPLC技术 432 15.2.1 二维分离中色谱柱和流动相的选择 432 15.2.2 HPLC中的柱后衍生 432 参考文献 433 附录1 美国药典(USP)中HPLC分析柱的分类 434 附录2 疏水固定相 439 附录3 亲水作用色谱(HILIC)和正向色谱(NPC)固定相 479 附录4 离子交换和离子调节色谱固定相 484 附录5 手性色谱固定相 491 附录6 尺寸排阻色谱固定相 496 附录7 流动相组分特征 500 索引 513
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