形态学实验技术_赵荧_9787811160758

　　有位前辈曾说过：一名合格的实验技术人员应具备听、说、读、写、思五项能力。听，听他人的实验思路、实践经验，以充实自身的实验设计；说，多与他人交流，在交流中捕捉灵感，丰满与纠正实验过程；读，博览全书，阅读文献著作，积累素材，优选实验方案；写，手要勤，随时记录实验感受与疑惑，寻找解决疑惑的途径；思，则最为重要，实验中存在一些不确定性因素，勤于思考，设计严谨周密的实验技术路线，随时调整实验流程与操作。
　　在当今生物学和医学领域中，由于新技术、新方法的层出不穷、日益更新，以及各个专业间的相互渗透与融合，这就要求实验技术人员不仅要熟知本专业的实验技术与方法，同时还应了解与熟悉其他与本专业相关的实验技术内容。实验技术的实质是实践经验积累与沉淀的过程，多次循环往复，不单单是实验技术熟练的过程，更是熟能生巧、巧中生新的过程。如Masson三色染色（Masson P，1929）经历了许多实验者不断摸索、改良与优化，以及各自对染色的理解与需求，使其在获得准确的染色结果前提下得到了技术上的提高，这就是一些传统技术方法一直能沿用至今的缘故。新技术、新方法应用的同时，传统实验技术也不应被忽略、放弃。为了能使更多的实验人员全面地了解形态学石蜡切片技术的相关内容，为了给以形态学改变为依托的研究课题提供实验原理、实验操作及注意事项等相应的信息，同时也是为了对过去所积累的实践经验进行梳理总结，十位不同院校的编者共同努力完成了本书的编写。
　　本书以实用性、稳定性、可操作性为编写宗旨。实用性是从使用者的角度，依据编者的实践经验总结和国内外实验技术的发展，去选择与编排实验技术方法与流程等，通过石蜡切片、苏木精一伊红染色、特殊染色以及免疫组织化学和原位杂交技术的介绍，使读者对石蜡切片技术有一个全面的了解，也为相关形态学技术的学习奠定基础。稳定性是指所选用的实验技术结果的稳定性，对于初学者而言，实验操作及实验结果呈现的可重复性尤为重要。而可操作性则是指从初学者的实际出发，对每项实验技术力求介绍其原理、具体实验操作及实验注意事项等，通俗易懂且操作性强，以期起到实验指南的作用。

　　第1章　形态学制片种类
　　组织学标本的制作有很多方法，但总体上可以粗略归纳为两大类：非切片制作方法和切片制作方法。
　　一、非切片制作方法
　　非切片制作方法，顾名思义就是无需借助于切片机（不需要切片操作）即可制成组织标本的方法。非切片法制作组织标本的种类很多，大致可包括：组织分离标本、组织活体标本、细胞涂片标本、磨片标本、整体封存标本、组织铺片标本6类。依据实验目的和所观察的实验对象的要求可适当地选择不同的标本制作方法。
　　非切片制作方法的优点：标本制作方法简单，组织结构基本不被破坏，能保持原有的组织或细胞的形态结构，最为重要的是标本内的细胞是完整的。制作过程所产生的人工假象较少；使用的药物、仪器较少；在较短的时间内即可观察到组织或细胞的形态。但是，非切片制作方法应用的范围局限，有些组织标本不能长期保存、不能观察到细胞内部的结构是其不足之处。
　　（一）组织分离标本
　　组织分离标本主要是观察机体的单个细胞形态结构，如平滑肌细胞、脊髓前角神经细胞、呼吸道或消化道的上皮细胞等。目前，分离标本制作的方法已不同于以前的应用范围，而是较为广泛地应用在许多专业，尤其是细胞培养方面的细胞形态学观察。
　　传统的组织分离标本制作方法：将一小块新鲜组织浸泡在一定浓度的某种化学试剂（氢氧化钠）中，通过化学作用（腐蚀作用），溶解组织内的结缔组织和细胞间质，再经过振荡、吹打和离心等程序，最后构成组织的细胞成为一个个分离的单细胞状态。
　　目前制作分离标本的方法：新鲜组织经过消化酶（胰蛋白酶等）的消化作用将被分离成单个细胞，再经密度梯度离心等步骤，可获得较为纯化的单个细胞悬液。

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