本书共列三十个分子生物学实验及其相关附录, 内容不仅涵盖了基因克隆、基因表达、核酸及蛋白分子杂交等分子生物学常规实验, 也包括基因检测、基因打靶、RNA干扰、蛋白分析等新型的分子生物学技术。每个实验包括原理介绍、实验操作、常见问题及注意事项。
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《分子生物学实验原理与技术实验》可用于高等院校生物、医药学科各专业本科生和研究生的分子生物学实验指导教材，同时也可作为从事相关领域的教学、科研人员的一本有益的参考书。
目录
前言
实验一 DNA的提取 1
实验二 核酸的定量 8
实验三 真核细胞总RNA的提取 11
实验四 PCR扩增目的基因 17
实验五 RT-PCR 25
实验六 DNA琼脂糖凝胶电泳 31
实验七 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 36
实验八 目的基因片段与载体的连接 39
实验九 用氯化钙法制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞 42
实验十 重组DNA的转化 44
实验十 DNA酶切 48
实验十二 转化克隆的筛选和鉴定 52
实验十三 质粒DNA的分离纯化 55
实验十四 含甘油培养物保藏法 65
实验十五 Southern blot分析 67
实验十六 Northern blot分析 74
实验十七 实时定量PCR技术 78
实验十八 环介导等温扩增技术 87
实验十九 mRNA差异显示技术 93
实验二十 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 97
实验二十一 SDS-PAGE检测蛋白质的表达 100
实验二十二 Western blot检测蛋白质的表达 107
实验二十三 双向电泳技术 114
实验二十四 DNA甲基化的检测 138
实验二十五 哺乳动物细胞中的RNA干扰技术 141
实验二十六 小鼠血浆microRNA提取技术 144
实验二十七 DNA芯片技术检测病原 147
实验二十八 TALEN载体的设计与构建 149
实验二十九 TALEN定点制备及筛选突变体 155
实验三十 CRISPR/Cas9介导的基因组定点编辑技术 157
主要参考文献 163
附录 166
实验一DNA的提取
【实验目的】
了解DNA提取的基本原理，掌握DNA的提取方法
【实验原理】
遗传信息全部储存在DNA -级结构之中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整
一分离纯化DNA的原则
(l)保持DNA分子一级结构的完整性温度不要过高;控制一定的pH范围(pH5~9)，保持一定的离子强度，减少物理因素对核酸降解的机械剪切力
(2)防止DNA的生物降解细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构因此，所用器械和一些试剂需要高温灭菌，提取缓冲液中也需要加核酸酶抑制剂
二分离提取核酸的主要步骤
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